ESTABELECIMENTO DAS CONDIÇÕES DE CULTIVO IN VITRO, CRIOPRESERVAÇÃO E SINCRONIZAÇÃO DO CICLO CELULAR DE AMOSTRAS SOMÁTICAS DE PEIXE-BOI DAS ANTILHAS (Trichechus manatus manatus, LINNAEUS, 1771)
mamíferos marinhos, criobancos, estratégias de conservação, célula somática, congelação lenta, vitrificação.
As ações antropogênicas, especialmente o descarte inadequado de resíduos, causam efeitos
permanentes na fauna marinha. Nesse sentido, o peixe-boi das Antilhas, o qual se caracteriza
como um mamífero importante para o equilíbrio ambiental, tem sofrido uma perda significativa
em seu quantitativo populacional, sendo considerado como vulnerável à extinção. Nesse
cenário, estudos voltados para o desenvolvimento de estratégias de conservação de seu material
biológico têm sido alvo de diferentes grupos de pesquisa. Uma interessante estratégia tem sido
o cultivo, a criopreservação, e a sincronização do ciclo celular de amostras somáticas, os quais
representam ferramentas para a conservação da espécie. Contudo, tais metodologias podem
variar de acordo com a espécie de interesse. Portanto, o objetivo consiste em avaliar diferentes
condições de cultivo in vitro, criopreservação e sincronização do ciclo celular de amostras
somáticas de peixe-boi das Antilhas. Para tanto, a proposta será dividida em três etapas. Na
primeira etapa, visando avaliar as condições de cultivo e criopreservação de tecidos
somáticos, fragmentos de derme abdominal serão criopreservados e cultivados comparando
dois métodos de criopreservação a campo (vitrificação direta em criotubo vs. vitrificação por
cobertura direta). Tecidos não criopreservados serão usados como controle. Na segunda etapa,
com o objetivo de avaliar as condições de cultivo e criopreservação de células somáticas,
células serão avaliadas durante diferentes passagens (1a, 5a, 10a e 15a passagem) e
criopreservadas utilizando diferentes concentraçõos e tipos de crioprotetores intracelulares
(dimetilsulfóxido e etilenoglicol) nas concentrações de 5%, 8% e 10%. Células não
criopreservadas serão usadas como controle. Na terceira etapa, visando analisar a
funcionalidade celular pela sua habilidade de ser sincronizada em G0/G1, células serão tratadas
sob diferentes métodos de sincronização do ciclo (privação de soro fetal bovino vs. inibição por
contato vs. 1 μg/mL nocodazol). Células em crescimento serão utilizadas como grupo controle.
Finalmente, essa proposta pretende contribuir para a conservação de peixe-boi das Antilhas,
permitindo o uso de amostras somáticas em programas de conservação dos sirênios.