Conservação de tecido somático de peixe-boi marinho, Trichechus manatus manatus (Linnaeus, 1758): Avaliação das técnicas de criopreservação e crioprotetores intracelulares
Mamíferos aquáticos, pele abdominal, criobancos, fauna silvestre
O peixe-boi marinho é um exemplar de mamífero aquático herbívoro de elevada importância ecológica para a biodiversidade mundial. Em virtude de seu declínio populacional e associado a esse papel ecológico, a criopreservação associada a formação de bancos de recursos somáticos representa uma ferramenta essencial para a conservação da espécie. Portanto, o objetivo do presente trabalho consiste em formar um criobanco de tecidos somáticos da pele abdominal do peixe-boi marinho. Para tanto, seis animais em processo de recuperação no Centro de Reabilitação da Fauna Marinha (Areia Branca, RN) serão utilizados. Dessa forma, amostras serão recuperadas e transportadas ao laboratório, onde serão fragmentadas (9,0 mm3) e destinadas a dois experimentos. No primeiro experimento, para a avaliação da técnica de criopreservação, os fragmentos serão distribuídos nos seguintes grupos: (i) não criopreservado (controle), e criopreservados por (ii) congelação lenta, (iii) vitrificação direta em criotubos e (iv) vitrificação em superfície sólida. No segundo experimento, após a definição da técnica de criopreservação, fragmentos serão distribuídos nos seguintes grupos: (i) não criopreservado (controle), e criopreservados em solução crioprotetora contendo meio essencial mínimo modificado com Dulbecco (DMSO), 10% de soro fetal bovino, 0,2 M de sacarose adicionado dos crioprotetores intracelulares (ii) dimetilsulfóxido (DMSO), (iii) etilenoglicol (EG) e (iv) associação de DMSO e EG, em concentrações a serem definidas de acordo com o resultado do primeiro experimento. Para ambos os experimentos, fragmentos serão avaliados quanto aos efeitos da criopreservação pelas suas características estruturais e ultraestruturais utilizando hematoxilina-eosina, tricrômico de Gomori, potencial proliferativo e microscopia eletrônica de varredura. Além disso, células resultantes dos fragmentos cultivados serão avaliadas quanto às características celulares/metabólicas, analisando morfologia, aderência, confluência, viabilidade por azul de tripan, atividade proliferativa com a elaboração de curva de crescimento e estimativa do tempo de duplicação da população celular, atividade metabólica, níveis apoptóticos e estresse oxidativo pela mensuração dos níveis de espécies reativas de oxigênio e potencial de membrana mitocondrial. Finalmente, espera-se com este trabalho contribuir com informações relacionadas à conservação de amostras somáticas derivadas de peixe-boi marinho, estabelecendo um criobanco de tecidos somáticos desta espécie.