Desenvolvimento de estratégias para a otimização da fecundação in vitro em catetos, Pecari tajacu (Linnaeus, 1758)
mamíferos silvestres, seleção e capacitação espermática, produção de embriões.
A fecundação in vitro (FIV) consiste numa biotécnica interessante para o conhecimento, multiplicação e conservação de catetos, mamíferos silvestres de importância ecológica, científica e econômica. Nesse sentido, o desenvolvimento de pontos estratégicos desta biotécnica é fundamental para a sua otimização na espécie. Recentemente, nosso grupo estabeleceu as condições de maturação in vitro de oócitos de catetos, bem como analisou a competência desses oócitos sobre o desenvolvimento embrionário. Portanto, as etapas seguintes da FIV consistem em aperfeiçoar as condições de preparo dos espermatozoides frescos e criopreservados e suas condições de co-incubação com oócitos maturados. Para tanto, a proposta será dividida em três etapas e em todos os experimentos serão avaliados espermatozoides frescos e criopreservados. Na primeira etapa, serão avaliadas, sobre os parâmetros espermáticos, as condições para o estabelecimento dos métodos de seleção:
gradiente de Percoll (Experimento 1) e swim up (Experimento 2), os quais as melhores condições serão comparadas entre si e com o método de centrifugação sobre a eficiência da fecundação heteróloga com oócitos suínos (Experimento 3). Na segunda etapa, serão avaliados agentes capacitantes [NaHCO3 vs. cafeína (1 e 2 mM) vs. NaHCO3 e cafeína (1 e 2 mM)] sobre os parâmetros espermáticos (Experimento 1) e os efeitos da capacitação sobre a eficiência da fecundação heteróloga com oócitos suínos (Experimento 2). Finalmente, na terceira etapa, diferentes tempos de co-incubação (1 vs. 3 vs. 6 h), concentrações espermáticas (0,5 vs. 5,0 x 105) (Experimento 1) e distintos meios (Experimento 2: TALP vs. TBM) serão avaliados quanto a eficiência da fecundação heteróloga com oócitos suínos. Finalmente, será realizada a FIV com espermatozoides e oócitos maturados de catetos (Experimento 3) usando as melhores condições estabelecidas. Para as avaliações espermáticas serão considerados parâmetros de motilidade, morfologia, funcionalidade da membrana, viabilidade, atividade mitocondrial, níveis de espécies reativas de oxigênio, integridade do DNA, reação acrossômica e capacitação espermática. Já após as avaliações de co-incubação de oócitos e espermatozoides serão analisados os parâmetros de interação oócito-espermatozoide, taxa de fecundação, cinética de desenvolvimento e qualidade embrionária. Assim, espera-se com o desenvolvimento dessas etapas, aperfeiçoar a FIV em catetos, visando a multiplicação e conservação desta espécie.