VITRIFICAÇÃO E CULTIVO DE TECIDO TESTICULAR DE CATETOS (PECARI TAJACU LINNAEUS, 1758) CRIADOS NO BIOMA CAATINGA
cateto, Tayassu tajacu, tecido gonadal, xenotransplante.
O objetivo do presente trabalho é avaliar os efeitos do dimetilsulfóxido (DMSO), dimetil formamida (DMF) e do etilenoglicol (EG) nas concentrações de 3M e 6M, sobre a conservação do tecido testicular de cateto, através da vitrificação em superfície sólida (VSS), definir o melhor tratamento e levalo para cultivo in vitro e in vivo (xenotransplante). Para tanto serão utilizados dez machos, provenientes do CEMAS da UFERSA, os quais serão utilizados em três experimentos distintos. Inicialmente os animais serão eutanásiados, em seguida os testículos serão coletados e lavados em álcool 70% para retirada de sangue e contaminantes. Para o experimento I, cinco pares de testículo serão divididos em fragmentos e um deles será imediatamente fixado para avaliação histológica e ultraestrutural, constituindo o grupo controle. Os demais serão submetidos à VSS e acondicionados em botijão de nitrogênio. Após duas semanas as amostras serão aquecidas, os crioprotetores serão removidos e os fragmentos de tecido testicular serão e submetidos à análise morfológica por histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. No experimento II, inicialmente será definido um meio para cultivo in vitro, no qual será testado o meio αMEM ou DMEM acrescido de fonte proteica (10% soro fetal bovino SFB ou 10% knockout serum replacement KSR). O meio que obtiver melhor resultado será utilizado no cultivo tridimensional do tecido testicular vitrificado. Experimento III, o tecido testicular vitrificado será submetido ao xenotranplante por 6, 8 e 10 meses. Os experimentos I, II e III serão avaliados quanto a histologia, viabilidade, fragmentação do DNA e proliferação celular. Para análise estatística os dados serão expressos em média ± erro padrão e para todas as análises, o software Statview 5.0 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA) será utilizado, considerando um valor de significância de P