Banca de DEFESA: JOÃO VITOR DA SILVA VIANA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : JOÃO VITOR DA SILVA VIANA
DATA : 21/02/2025
HORA: 14:00
LOCAL: Google meet
TÍTULO:

COMPARAÇÃO DO NÚMERO DE PASSAGENS, CRIOPROTETORES E MÉTODOS DE SINCRONIZAÇÃO DO CICLO EM G0/G1 DE FIBROBLASTOS DE GATO-DO-MATO-PEQUENO (Leopardus tigrinus SCHREBER, 1775)

PALAVRAS-CHAVES:

pequenos felídeos, criobancos, células somáticas, privação de soro fetal bovino

PÁGINAS: 182
RESUMO:

O gato-do-mato-pequeno é um mesopredador que auxilia no equilíbrio de seu habitat. Contudo, ele tem sofrido constantes ameaçadas, sendo considerado uma espécie vulnerável à extinção. Neste contexto, bancos de células somáticas associados às ferramentas de reprogramação nuclear tornam-se essenciais para a conservação da espécie. Portanto, o objetivo foi comparar o número de passagens, crioprotetores e métodos de sincronização em G0/G1 de fibroblastos de gato-do-mato-pequeno. Para tanto, células somáticas derivadas da pele de quatro animais provenientes de zoológicos, foram identificadas como fibroblastos por ensaios de imunocitoquímica e cariotipagem. Em seguida, fibroblastos foram distribuídos em três experimentos. No primeiro experimento, fibroblastos foram cultivados por diferentes passagens (terceira, sexta e décima primeira) e submetidos à criopreservação. No segundo experimento, células foram criopreservadas por congelação lenta em diferentes concentrações de dimetilsulfóxido (2,5 e 10% de DMSO), na ausência e presença de 0,2 M de sacarose ou 100 mM de L-prolina, e avaliadas antes e após a criopreservação. Em ambos os experimentos, células foram avaliadas quanto à morfologia, viabilidade, atividade metabólica, atividade proliferativa, níveis das espécies reativas de oxigênio (EROs), potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm), e níveis apoptóticos. Exclusivamente no primeiro experimento, células foram avaliadas em sistema sem antibiótico, e análise ultraestrutural. No terceiro experimento, fibroblastos foram submetidos à sincronização em G0/G1, onde foram avaliados após diferentes condições [incubação com roscovitina a 7,5 e 15 µM (24 e 48 h), inibição por contato (24–72 h) e privação de soro fetal bovino (24–96 h)]. Neste experimento, células foram avaliadas quanto à morfologia, viabilidade, níveis de apoptose e capacidade de sincronização em G0/G1. No primeiro experimento, foi observada uma redução na atividade metabólica e ΔΨm na sétima e décima primeira passagem, bem como a décima primeira passagem resultou em alterações na proliferação celular e morfologia. Demais parâmetros não foram alterados. No segundo experimento, 10% de DMSO apresentou os melhores resultados promovendo manutenção da viabilidade imediatamente após a descongelação e níveis de EROs. No terceiro experimento, a privação de soro fetal bovino foi o único método que promoveu aumento na taxa de células em G0/G1 de 86,0% ± 0,9 para 91,4% ± 1,7; contudo, ele reduziu o número de células viáveis de 99,8% ± 0,3 para 93,3% ± 0,6. Os demais grupos [roscovitina e inibição por contato] não aumentaram as taxas de células em G0/G1. Em conclusão, células de gato-do-mato-pequeno apresentaram sensíveis a número de passagens a partir da sétima passagem. Ainda, tais células demonstraram que podem ser criopreservadas com 10% de DMSO, apresentando alta viabilidade após a descongelação. Finalmente, a privação com soro demonstrou ser o método capaz de sincronizar células em G0/G1. Adicionalmente, o estabelecimento dessas etapas possibilitará os próximos passos para aplicação de células de gato-do-mato-pequeno visando sua conservação.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - Cristiana Libardi Miranda Furtado - UNIFOR
Presidente - 2028000 - ALEXSANDRA FERNANDES PEREIRA
Externa à Instituição - FABIANA FERNANDES BRESSAN - USP