A espécie Aspidosperma pyrifolium Mart. tem sido indicada como sendo tóxica para os animais. No entanto, são escassos os estudos sobre a toxicidade dessa planta. Este trabalho objetivou identificar a existência de efeito tóxico, citotóxico e mutagênico de folhas A. pyrifolium no sistema teste Allium cepa e em camundongos. Foi feita a análise de crescimento de raízes, índice de crescimento relativo, germinabilidade, taxa de germinação, índice de germinação e índice mitótico com o teste Allium cepa. Para a DL50 foram utilizados grupos de camundongos, observados por 14 dias para determinar a quantidade de mortos, doentes e sobreviventes. Para o teste de micronúcleo e células binucleadas foi feita a extração da medula óssea dos animais. Os bioensaios realizados revelaram que o extrato aquoso das folhas secas mostrou efeito tóxico na concentração de 300 mg/L e as folhas frescas foram tóxicas na maioria dos testes tendo efeito citotóxico e subletal na concentração de 5 mg/L. O extrato mostrou-se letal na concentração de 900 mg/Kg para as fêmeas e na concentração de 1200 mg/Kg para os dois sexos nas amostras estudadas. Os animais avaliados apresentaram alterações comportamentais e alteração no ganho de peso. As concentrações testadas mostraram potencial mutagênico e citotóxico tanto para o gênero, como na análise geral das frequências de micronúcleo e células binucleadas. Este trabalho fornece dados de toxicidade, citotoxicidade e mutagenicidade ainda não investigados para a espécie A. pyrifolium, sendo, então, dados inéditos na literatura.