Criopreservação e sincronização do ciclo celular de fibroblastos de onças-pardas, Puma concolor (Linnaeus, 1771), submetidos a diferentes condições
felídeos silvestres, bancos de células somáticas, cultivo in vitro, citometria de fluxo
A redução de onças-pardas associada à sua importância ecológica tem resultado no desenvolvimento de bancos de fibroblastos. Em geral, o sucesso destes bancos e sua aplicação na transferência nuclear de célula somática depende da escolha das condições de criopreservação e sincronização do ciclo celular. Portanto, o objetivo consiste em comparar soluções de criopreservação e métodos de sincronização de fibroblastos de onças-pardas. Para tanto, a proposta será dividida em duas etapas. Na primeira etapa, fibroblastos serão criopreservados usando combinações de crioprotetores intracelulares e extracelulares: (i) 10% dimetilsulfóxido (DMSO) + 10% soro fetal bovino (SFB), (ii) 10% etilenoglicol (EG) + 10% SFB, (iii) 10% DMSO + 50% SFB, (iv) 10% EG + 50% SFB, (v) 10% DMSO + 10% SFB + 0,2 M sacarose (SAC), (vi) 10% DMSO + 50% SFB + 0,2 M SAC, (vii) 10% EG + 10% SFB + 0,2 M SAC, (viii) 10% EG + 50% SFB + 0,2 M SAC. Células não-criopreservadas serão usadas como controle. Todas as células serão avaliadas quanto à morfologia, viabilidade, atividade proliferativa, metabólica, estresse oxidativo, danos mitocondriais e apoptose. Na segunda etapa, fibroblastos serão sincronizados em G0/G1 usando: (i) inibição por contato por 24–120 h, (ii) privação de SFB por 24–120 h, (iii) inibição com 10 µg/mL cicloheximida, 2 mM 6-dimetilaminopurina e 7,5 µg/mL citocalasina B por 12–24 h. Células não-sincronizadas serão usadas como controle. Todas as células serão avaliadas quanto ao estágio do ciclo e apoptose. Finalmente, a proposta representará uma etapa no estabelecimento de bancos de fibroblastos de onça-parda, visando sua aplicação em biotécnicas de conservação.