USO DA MANIPULAÇÃO DE FOLÍCULOS OVARIANOS PRÉ-ANTRAIS PARA A CONSERVAÇÃO DE TECIDO OVARIANO DE CUTIAS (Dasyprocta leporina)
folículos, germoplasma, cultivo in vitro, cutia.
O objetivo do presente estudo foi utilizar a manipulação de oócitos inclusos em folículos ovarianos pré antrais (MOIFOPA) como ferramenta para o resgate e conservação do uso de gametas femininos de cutias (Dasyprocta leporina). A tese foi dividida em duas fases experimentais. O primeiro experimento foi verificado o uso do TCM-199 suplementado com diferentes concentrações de pFSH (10 e 50 ng/mL) sob a morfologia, desenvolvimento e viabilidade de PAFs inclusos em tecido ovariano. Em seguida, verificou-se o efeito desse sistema de VCI sobre os mesmos parâmetros dos PAFs submetidos à vitrificação. Após o cultivo, o grupo FSH50 apresentou maior porcentagem de folículos morfologicamente normais quando comparado ao grupo FSH10 (P 0,05). Assim, o grupo FSH50 foi utilizado para experimento posterior, no qual um total de 76,2 ± 7,2% de PAFs normais previamente vitrificados foi encontrado após a cultivo de 6 dias, apresentando também os maiores valores (P 0,05). No segundo experimento, os ovários de oito fêmeas foram recuperados e fragmentados, com quatro fragmentos de córtex imediatamente fixados e avaliados (grupo fresco). Os demais fragmentos foram processados pelo método de vitrificação de superfície sólida (SSV) ou ovarian tissue cryosystem (OTC) usando soro fetal bovivo (SFB), etilenoglicol (EG) e sacarose (SAC) como crioprotetores, armazenados por duas semanas a -196 ºC e reaquecidos. Posteriormente, os fragmentos foram submetidos a um cultivo in vitro de 24 horas e avaliados quanto à carga microbiológica, morfologia do PAF e integridade do DNA. Não houve contaminação fúngica; entretanto, as amostras vitrificadas de dois indivíduos apresentaram contaminação bacteriana de 79 200 unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC) / mL para SSV e 3 120 UFC / mL para OTC. Em relação à morfologia do PAF, ambos os sistemas proporcionaram preservação adequada da morfologia, com valores superiores a 70% dos folículos normais observados antes e após a cultivo. O TUNEL revelou que tanto a SSV (52,39%) quanto o OTC (41,67%) podem preservar a integridade do DNA após a vitrificação e após 24 h de cultivo. Para a proliferação celular, baixas taxas foram detectadas para amostras frescas (11,53%) e SSV (29,87%); no entanto, nenhuma evidência de proliferação foi encontrada quando OTC foi usado. Assim, como conclusão geral, o uso da MOIFOPA em cutias permitiu o conhecimento de aspectos relacionados a sua morfofisiologia reprodutiva, possibilitando tanto a conservação do material genético, com a possibilidade de formação de bancos de germoplasma; e ainda a elucidação dos mecanismos relacionados a sobrevivência e desenvolvimento dos FOPA in vitro.