Banca de DEFESA: LIVIA BATISTA CAMPOS

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: LIVIA BATISTA CAMPOS
DATA: 18/01/2019
HORA: 14:00
LOCAL: Mini-auditório Centro Integrado de Laboratórios em Ciência Animal e recursos Hidricos do Semi-Árido
TÍTULO:

ISOLAMENTO, CULTIVO E CRIOPRESERVAÇÃO DE FOLIUCLOS OVARIANOS PRÉANTRAIS DERVIADOS DE CATETOS (PECARI TAJACU LINNAEUS, 1758). 

PALAVRAS-CHAVES:

e: isolamento, cultivo e criopreservação.

PÁGINAS: 145
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Medicina Veterinária
RESUMO:

Manipulação de Oócitos Inclusos em Folículos Ovarianos Pré-antrais é uma biotecnica que pode melhorar o aproveitamento do potencial reprodutivo dos catetos e garantir a conservação da espécie. Essa biotécnica pode ser dividida nas etapas de isolamento, cultivo in vitro e conservação. Diante disso, objetivou estabelecer protocolos eficientes para a manipulação de folículos ovarianos pré-antrais derivados de catetos (Pecari tajacu). Para tanto, o estudo foi dividido em três experimentos, sendo utilizado animais oriundos do Centro de Multiplicação de Animais Silvestres. No experimento 1, os ovários foram destinados a diferentes métodos de isolamento folicular (enzimático, mecânico e associação). Para o método enzimático utilizou à colagenase tipo IV, já o método mecânico foi conduzido usando uma lâmina de bisturi. Por fim, a solução remanescente obtida do isolamento mecânico foi submetida ao método enzimático compondo assim a associação dos métodos. O número de folículos pré-antrais (PFs) foi quantificado, classificado e analisado quanto a viabilidade. Posteriormente, realizou-se à integridade por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e cultivo in vitro de 24 h. Logo, a maior quantidade de PFs foi proporcionado pelo método enzimático (961,7 ± 132,9) em comparação ao método mecânico (434,3 ± 88,9), mas não foram evidenciadas diferenças entre sua associação (743,2 ± 92,8). Também, o método enzimático (98,7 ± 0,6%) proporcionou maior viabilidade, na qual foi confirmada pela MEV e o cultivo (86,0% de PFs viáveis). No experimento 2, os fragmentos ovarianos foram utilizados para análise de PCR, no intuito de identificar a expressão de BMPR2 (receptor tipo I) e ALK-5 (receptor tipo II) e para cultivo in vitro por 1 ou 7 dias com GDF-9 (0, 50, 100 ou 200 ng/mL) analisados quanto à sobrevivência, ativação, viabilidade e proliferação celular dos PFs. Foi confirmada a presença de BMPR2 (receptor tipo I, 499 pb) e ALK-5 (receptor tipo II, 468 pb) nos córtex ovarianos de catetos. Embora não tenha sido observada diferença na porcentagem de folículos morfologicamente normais, apenas os folículos cultivados por 7 dias com 200 ng / mL de GDF-9 mantiveram o diâmetro folicular e oocitário similar àqueles observados no primeiro dia. Em comparação com o controle fresco, a porcentagem de folículos em crescimento foi significativamente aumentada em todos os tratamentos, especialmente na 200 ng / mL de GDF-9 por 7 dias. Ainda, a presença de GDF-9 não interferiu na viabilidade dos PFs, mas 200 ng / mL de GDF-9 melhorou a proliferação celular no dia 1 ou 7 dias de cultivo in vitro. Por fim, no experimento 3, os fragmentos ovrianos foram destinadas a vitrificação em superfície sólida e o sistema cryosystem com 3 M etilenoglicol ou 3 M dimetilsulfóxido ou 1,5 M de etilenoglicol mais 1,5 M de dimetilsulfóxido. Os fragmentos submetidos a análise histológica, viabilidade, proliferação celular e caspase-3. Após a vitrificação, todos os tratamentos mantiveram a proporção de PFs normais, a viabilidade, bem como, a ocorrência de proliferação celular não sendo observado diferença estatística entre eles. Quanto a analise da caspase-3, o grupo controle obteve 36,7% de folículos marcados para caspase-3 ativada, nos quais não diferiu das amostras vitrificadas na SSV com EG (43,4%) e com a associação de crioprotetores (33,4%), bem como, com as amostras vitrificadas em OTC quando se utilizou EG (46,7%). Conclui-se que o método enzimático é um procedimento eficiente para o isolamento de PFs ovarianos de catetos, bem como, confirma a presença de receptores BMPR2 e ALK-5 para o GDF-9 e sua atividade na concentração de 200 ng / mL no desenvolvimento in vitro de PFs de catetos. E por fim, a vitrificação usando o método SSV ou OTC com etilenoglicol (3M) como crioprotetores é eficiente para preservação do tecido ovariano de catetos.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2515320 - ALEXANDRE RODRIGUES SILVA
Interno - 2028000 - ALEXSANDRA FERNANDES PEREIRA
Externo à Instituição - GABRIELA LIBERALINO LIMA - IFCE
Externo à Instituição - MARIA HELENA TAVARES DE MATOS - UNIVASF