Banca de QUALIFICAÇÃO: MARIA BÁRBARA SILVA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: MARIA BÁRBARA SILVA
DATA: 01/11/2018
HORA: 09:00
LOCAL: Auditório do Centro de Ciências Biológicas e da Saúde
TÍTULO:

ESTABELECIMENTO DE CARIOPLASTOS DE ONÇA-PINTADA (Panthera onca LINNAEUS, 1758) VISANDO A TRANSFERÊNCIA NUCLEAR DE CÉLULAS SOMÁTICAS

PALAVRAS-CHAVES:

mamíferos silvestres, linhagem celular, criopreservação, sincronização em G0/G1

PÁGINAS: 36
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Medicina Veterinária
RESUMO:

O crescente número de mamíferos silvestres ameaçados de extinção, como a onça-pintada, tem resultado no desenvolvimento da clonagem por transferência nuclear de células somáticas (TNCS) como uma ferramenta de conservação dessas espécies. Nesse sentido, uma das etapas essenciais no sucesso da clonagem consiste na obtenção adequada das células doadoras de núcleo (carioplastos) dos animais que se pretende clonar. Portanto, o objetivo do presente estudo será estabelecer os carioplastos derivados da pele do pavilhão auricular apical de cinco onças-pintadas adultas, visando o estudo futuro dessas células na TNCS e reprogramação nuclear. Para tanto, fragmentos teciduais de uma fêmea e quatro machos, mantidos em zoológicos, serão cultivados in vitro para obtenção de células somáticas. Após a recuperação celular, amostras na terceira passagem serão divididas em dois experimentos. No primeiro experimento, visando a obtenção de linhagens celulares, células somáticas em cultivo serão caracterizadas quanto às seus aspectos biológicos para morfologia por meio de microscopia de luz invertida, viabilidade por integridade da membrana por ensaio de azul de tripan, atividade proliferativa por meio da elaboração da curva de crescimento e determinação do tempo de duplicação celular (PDT), atividade metabólica usando o ensaio de 3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil brometo de tetrazolina, estresse oxidativo por mensuração dos níveis das espécies reativas de oxigênio usando sonda diacetato de 2’,7’-diclorodihidrofluoresceína (H2DCFDA), danos mitocondriais por mensuração do potencial de membrana mitocondrial usando sonda MitoTracker Red (CMXRos), análise dos níveis de apoptose por ensaio de laranja de acridina e brometo de etídio, e marcação imunocitoquímica para vimetina para identificação do tipo celular.  Adicionalmente, o cultivo dessas células será avaliado quanto à ausência de contaminação biológica. Ainda neste experimento, células serão avaliadas de acordo com as análises anteriormente descritas quanto à criotolerância após congelação lenta usando solução de 1,5 M de dimetilsulfóxido e 0,2 M de sacarose. No segundo  experimento, células serão avaliadas quanto a sua capacidade de serem sincronizadas em G0/G1 do ciclo celular, considerada a última etapa da TNCS na preparação dos carioplastos. Assim, células sem nenhum método de sincronização (controle) e sincronizadas por três diferentes métodos (privação de soro fetal bovino, inibição por contato e inibição química por ciclohexamida) e por diferentes tempos (24–120 h), serão analisadas por citometria de fluxo usando iodeto de propídeo quanto à fase do ciclo. Além disso, células serão avaliadas quanto aos níveis de apoptose por ensaio de laranja de acridina e brometo de etídio e atividade proliferativa por meio da elaboração de curva de crescimento e determinação do PDT. Assim, essa proposta pretende contribuir para o estabelecimento de linhagens celulares a serem usadas como carioplastos na clonagem por TNCS e reprogramação nuclear de onças-pintadas.

MEMBROS DA BANCA:
Interno - 2515320 - ALEXANDRE RODRIGUES SILVA
Presidente - 2028000 - ALEXSANDRA FERNANDES PEREIRA
Interno - 2330828 - CARLOS EDUARDO BEZERRA DE MOURA