Avaliação de carioplastos e oócitos receptores visando à transferência nuclear de células somáticas em catetos (Pecari tajacu LINNAEUS, 1758).
Mamíferos silvestres, clonagem, células em G0/G1, ativação oocitária artificial.
A transferência nuclear de células somáticas (TNCS) consiste numa interessante biotécnica para a conservação da biodiversidade, o aumento da produtividade dos rebanhos e o estudo dos mecanismos celulares e embrionários. Especificamente para os catetos, mamíferos silvestres de importância ecológica, científica e econômica, a TNCS consiste numa ferramenta alternativa nas pesquisas relacionadas ao conhecimento e a conservação desta espécie. Nesse sentido, o desenvolvimento dos diferentes passos da produção de
embriões clones seria a etapa inicial no uso desta biotécnica na espécie. Portanto, o objetivo da presente proposta será avaliar as condições de manipulação de carioplastos (células doadoras de núcleo) e oócitos receptores, visando à TNCS em catetos. Para tanto, a proposta será dividida em duas etapas. Na primeira etapa, para avaliação das condições dos carioplastos, fragmentos auriculares derivados de indivíduos adultos mantidos no Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA) serão cultivados in vitro e células recuperadas serão destinadas a dois experimentos. No primeiro experimento, para o estabelecimento de uma linhagem de células somáticas, células serão avaliadas quanto à viabilidade por integridade da membrana, atividade proliferativa, atividade metabólica, manutenção das características cromossômicas, ausência de contaminação biológica, caracterização imunohistoquímica e análise de criotolerância usando diferentes
concentrações de soro fetal bovino (10% vs. 50%) na ausência (0,0 M) e presença de sacarose (0,2 M). Já no segundo experimento, para o estabelecimento de protocolos de sincronização celular em G0/G1, células serão submetidas a quatro grupos: controle (sem nenhum método de sincronização), inibição por contato, privação de soro fetal bovino e indução com ciclohexamida em diferentes tempos. Na segunda etapa, para avaliação das
condições dos oócitos receptores, gametas de fêmeas adultas mantidas no CEMAS/UFERSA serão destinados a dois experimentos. No primeiro experimento, para o estabelecimento de protocolos de maturação in vitro, oócitos serão avaliados quanto ao período de maturação (24 h vs. 48 h) e suplementações dos meios de maturação (FSH vs. FSH e EGF). Já no segundo experimento, para a avaliação da capacidade de ativação
oocitária, estruturas serão ativadas comparando quatro protocolos de ativação artificial: i) ionomicina e 6-DMAP, ii) ionomina, 6-DMAP e citocalasina B, iii) ionomicina e ciclohexamida, iv) ionomicina, ciclohexamida e citocalasina B. Tanto para o primeiro experimento (oócitos maturados), quanto para o segundo experimento (embriões), estruturas serão avaliadas quanto à competência meiótica, competência de desenvolvimento in vitro e qualidade das estruturas após cultivo in vitro. Finalmente, esperase com esta proposta conhecer as condições adequadas para obtenção de carioplastos e oócitos receptores aptos para a TNCS em catetos.