Banca de DEFESA: ÉRIKA ALMEIDA PRAXEDES

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : ÉRIKA ALMEIDA PRAXEDES
DATA : 27/04/2023
HORA: 14:00
LOCAL: Google Meet
TÍTULO:

Obtenção de carioplastos e citoplastos como etapas da reprogramação nuclear em Dasyprocta leporina (Linnaeus, 1758).

PALAVRAS-CHAVES:

Roedores silvestres. Células somáticas. Maturação oocitária in vitro. Criopreservação de células somáticas. Sincronização do ciclo celular.

PÁGINAS: 200
RESUMO:

A reprogramação nuclear usando a transferência nuclear de célula somática ou a indução de células à pluripotência possibilita a exploração do potencial de células somáticas visando a multiplicação e conservação de espécies, tais como a Dasyprocta leporina, roedor silvestre de interesse ecológico, econômico e científico. Portanto, a presente tese objetivou investigar as condições envolvidas no estabelecimento de carioplastos e citoplastos derivados de D. leporina. Para tanto, a tese foi dividida em duas etapas, tendo cada etapa de 2–3 experimentos. A primeira etapa consistiu em avaliar as condições de obtenção de carioplastos, sendo realizadas comparações do tempo de cultivo (2a, 5a, 8a passagem) e criotolerância (experimento 1), das condições das soluções crioprotetoras (10% de dimetilsulfóxido [DMSO], na ausência e presença de 0,2 M de sacarose [SAC], e 10%, 40% e 90% de soro fetal bovino [SFB], experimento 2) e dos métodos de sincronização do ciclo em G0/G1 (inibição por contato, privação de soro fetal bovino, e 10 μM de roscovitina em diferentes tempos, experimento 3). No primeiro experimento, nós identificamos seis linhagens fibroblásticas por morfologia, imunofluorescência e cariotipagem. Além disso, o cultivo após todas as passagens, bem como a criopreservação não afetaram o metabolismo e os níveis de apoptose. Contudo, células na quinta passagem (30,8 h e 1,4 unidades arbitrárias) apresentaram uma redução na atividade proliferativa e aumento de espécies reativas de oxigênio (EROs), quando comparadas à segunda (16,5 h e 1,0 unidades arbitrárias) e oitava passagem (17,6 h e 0,8 unidades arbitrárias). Além disso, a criopreservação reduziu o potencial mitocondrial (ΔΨm) comparada às células não submetidas à criopreservação (0,6 e 1,0). No segundo experimento, nenhuma diferença foi observada entre os grupos criopreservados em diferentes soluções e células não submetidas à criopreservação para viabilidade, atividade metabólica, atividade proliferativa e níveis de EROs. Curiosamente, apenas as células criopreservadas com 90% de SFB e SAC mantiveram ΔΨm similar às células não submetidas à criopreservação. Isso indica que em altas concentrações de SFB, SAC contribui para a manutenção desse parâmetro em células criopreservadas. Portanto, 90% de SFB e 0,2 M de SAC promovem maior conservação das células após a criopreservação. No terceiro experimento, nenhuma diferença foi observada para a morfologia, viabilidade e níveis de apoptose entre os métodos de sincronização em G0/G1 avaliados. Contudo, a privação com soro por 24 a 120 h e roscovitina por 12–48 h foram hábeis em promover a sincronização em G0/G1 de fibroblastos. Adicionalmente, a inibição por contato em nenhum dos tempos avaliados promoveu a sincronização em G0/G1. Já a segunda etapa consistiu em avaliar as condições de obtenção de citoplastos, sendo realizados comparações da concentração de FSH (10, 50 e 75 mUI/mL, experimento 1) e do fator de crescimento epidermal (EGF, 10, 50 e 100 ng/mL, experimento 2) sobre a maturação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial. No primeiro experimento, nenhuma diferença foi observada entre os grupos quanto à expansão e viabilidade das células do cumulus, bem como a presença do primeiro corpúsculo polar e morfometria oocitária. Contudo, somente oócitos maturados com 10 mUI/mL de FSH resultaram em mórulas após a ativação artificial (33,3%). No segundo experimento, 10 (20,0%) e 100 (26,7%) ng/mL de EGF na presença de 10 mUI/mL de FSH (18,8%) foram hábeis na maturação oocitária, resultando em mórulas após a ativação oocitária. Contudo, somente oócitos maturados com 10 ng/mL de EGF e 10 mUI/mL de FSH resultaram em um melhor índice de expansão de células do cumulus. Em síntese, nossos resultados indicam as condições adequadas de obtenção de carioplastos e citoplastos de D. leporina, visando o emprego destas células em estudos de reprogramação nuclear para a conservação da espécie.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2028000 - ALEXSANDRA FERNANDES PEREIRA
Interno - 2330828 - CARLOS EDUARDO BEZERRA DE MOURA
Externa à Instituição - LUCIANA DINIZ ROLA - UFPB
Externa à Instituição - FABIANA FERNANDES BRESSAN - USP
Externo à Instituição - JOSÉ ROBERTO VIANA SILVA - UFC