Banca de QUALIFICAÇÃO: LEONARDO VITORINO COSTA DE AQUINO

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : LEONARDO VITORINO COSTA DE AQUINO
DATA : 23/08/2022
HORA: 14:00
LOCAL: Plataforma Online (Google Meet)
TÍTULO:

Estabelecimento das primeiras etapas da transferência nuclear de célula somática em Galea spixii (Wagler, 1831)

PALAVRAS-CHAVES:

Cavídeos, clonagem, células somáticas, fator de crescimento epidermal, ativação oocitária artificial.

PÁGINAS: 42
RESUMO:

O direcionamento das primeiras etapas da transferência nuclear de célula somática (TNCS) em
Galea spixii poderá ser uma efetiva estratégia para a conservação e conhecimento da espécie,
perante sua importância ecológica e seu emprego como modelo experimental para outros
cavídeos. Portanto, o objetivo da presente proposta consiste em estudar as condições de
manipulação de células doadoras de núcleo ou carioplastos (etapa 1) e células doadoras de
citoplasma ou citoplastos (etapa 2), visando o estabelecimento das primeiras etapas da TNCS
na espécie. Na primeira etapa, linhagens de células somáticas serão obtidas a partir do cultivo
de tecidos auriculares derivados de seis G. spixii e avaliadas quanto ao número de passagens
(2ª, 5ª, 8ª, e 10ª passagem) e criotolerância (experimento 1). Todas as linhagens celulares serão
confirmadas por morfologia, imunofluorescência e cariotipagem. Além disso, linhagens
celulares serão avaliadas quanto à diferentes soluções de crioprotetores contendo 10% de
dimetilsulfóxido, 10% de soro fetal bovino (SFB) na presença ou ausência de 0,2 M de sacarose
e 5 mM de L-prolina (experimento 2). Adicionalmente, visando avaliar a funcionalidade
celular, células serão sincronizadas em G0/G1 usando diferentes condições (privação de SFB
vs. inibição por contato vs. roscovitina) por diferentes tempos (24 a 120 h) (experimento 3).
Nesta etapa, células serão avaliadas quanto aos parâmetros morfológicos, viabilidade, atividade
proliferativa, metabolismo, estresse oxidativo, e níveis de apoptose. Na segunda etapa, oócitos
imaturos serão obtidos de seis G. spixii e maturados in vitro na ausência e presença de 10 e 50
ng/mL de fator de crescimento epidermal (experimento 1). Além disso, oócitos maturados
derivados de seis G. spixii serão ativados artificialmente comparando dois sistemas de ativação
oocitária (cloreto de estrôncio (SrCl2) + citocalasina B (CB) vs. SrCl2 + 6-dimetilaminopurina
+ CB) (experimento 2). Ainda, oócitos maturados e ativados artificialmente de seis G. spixii
serão cultivados nos meios fluido sintético do oviduto (SOF) e meio simples otimizado e
enriquecido de potássio (KSOM) (experimento 3). Nesta etapa, oócitos serão avaliados quanto
à competência meiótica e cinética de desenvolvimento embrionário. Finalmente, espera-se
contribuir para o estudo do G. spixii a partir do estabelecimento das primeiras etapas da TNCS.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - Daniele dos Santos Martins
Presidente - 2028000 - ALEXSANDRA FERNANDES PEREIRA
Externo à Instituição - RIBRIO IVAN TAVARES PEREIRA BATISTA