EFICÁCIA DE VACINAS RECOMBINANTES DE SUBUNIDADE ASSOCIADAS A SAPONINA PARA LINFADINITE CASEOSA EM OVINOS.
Corynebacterium pseudotuberculosis, Linfadenite Caseosa, rCP01850, rCP09720.
Nos últimos anos, formulações vacinais contendo antígenos recombinantes de Corynebacterium pseudotuberculosis vem sendo testadas. No entanto, apesar de alguns desses alvos terem apresentado resultados promissores, a maioria desses trabalhos tem se limitado a avaliação em modelo murino, sendo escassos os dados sobre o comportamento de vacinas recombinantes de subunidade em pequenos ruminantes. Assim, o presente projeto objetiva avaliar o potencial imunoprotetor de vacinas contendo as proteínas recombinantes rCP01850 ou rCP09720 de C. pseudotuberculosis associadas ao adjuvante saponina em ovinos. As proteínas rCP01850 e rCP09720 serão expressas de forma heteróloga em Escherichia coli, purificadas, e testadas quanto à sua imunogenicidade através de Western Blot utilizando soros de animais com linfadenite caseosa (LC) clínica, bem como de animais livres da doença. Para os experimentos de imunização e desafio, serão utilizados 18 ovinos nativos e soronegativos para a LC, que serão divididos em 3 grupos de 6 animais cada. Os animais serão distribuídos randomicamente nos seguintes grupos: G1, inoculado com solução salina 0,9% (grupo controle); G2, imunizado com rCP01850 associado ao adjuvante saponina; G3, imunizado com rCP09720 mais o adjuvante saponina. Serão administradas 2 doses de cada tratamento por via subcutânea (s.c.), intervaladas por 21 dias. O desafio será realizado 30 dias após a última dose da vacina através da inoculação por via s.c. de 104 UFC da cepa virulenta MIC6 de C. pseudotuberculosis. Os animais desafiados serão avaliados clinicamente por 12 semanas, e ao final deste período serão abatidos. Linfonodos e órgãos internos serão avaliados quanto à presença de lesões, e amostras serão tomadas para a análise histopatológica, extração de DNA e realização de PCR para confirmar a presença de C. pseudotuberculosis. Amostras de sangue serão coletadas dos ovinos um dia antes da primeira imunização (dia 0), e nos dias 21, 51, 81, 111 e 141 do experimento objetivando a realização de ELISA para a detecção de anticorpos anti-rCP01850, anti-rCP09720, . Nesses mesmos dias serão coletadas também células periféricas mononucleares (PBMCs), para cultivo, estímulo com os antígenos recombinantes, quantificação de mRNA de citocinas para avaliação da resposta celular. Espera-se, com a execução deste projeto, a obtenção de uma formulação vacinal eficiente contra LC para uso em ovinos.